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　　離子對(duì)試劑的選擇 離子對(duì)試劑的種類和濃度對(duì)分離效果都有較大和影響.離子對(duì)試劑種類的選擇依賴于被分離樣品的性質(zhì).被分離溶質(zhì)是強(qiáng)酸或強(qiáng)堿,離子對(duì)試劑可以是強(qiáng)酸或強(qiáng)堿, 弱堿或強(qiáng)酸,弱酸,如被分離的溶質(zhì)是弱酸或弱堿,則選用的離子對(duì)試劑必須是強(qiáng)堿或強(qiáng)酸.對(duì)于溶質(zhì)結(jié)構(gòu)性質(zhì)相差較大的混合樣品,離子對(duì)試劑種類的選擇并沒(méi)有特殊要求.離子對(duì)試劑疏水性的差別可以通過(guò)調(diào)節(jié)離子對(duì)試劑濃度和有機(jī)溶劑濃度獲得滿意的分離效果.

　　離子對(duì)試劑用于高壓液相離子對(duì)萃取的液相色譜法分離分析強(qiáng)極性有機(jī)酸和有機(jī)堿的好方法。廣泛應(yīng)用于生物化學(xué)，藥物學(xué)，和石油化工等領(lǐng)域。

　　一、用于酸性化合物 1、四丁基氫氧化銨（10%水溶液） 2、四丁基溴化銨 3、十二烷基三甲基氯化銨

　　二、用于酸性化合物 1、戊烷磺酸鈉 2、己烷磺酸鈉 3、庚烷磺酸鈉 4、辛烷磺酸鈉 5、癸烷磺酸鈉

　　離子對(duì)試劑是高效液相色譜專用試劑，主要分析測(cè)試有機(jī)堿類離子化合物，代替離子交換法，具有可靠的分離效果。也可用于分析多肽和蛋白質(zhì)，是制備抗靜電聚脂纖維的中間體.

離子對(duì)試劑知識(shí)二

1、作用原理

“加入離子對(duì)試劑后，它可以與待分析的物質(zhì)（多為在溶液狀態(tài)時(shí)顯以與離子對(duì)試劑相反的電荷）結(jié)合成離子對(duì)而呈中性，這樣非極性就表現(xiàn)出來(lái)，從而在色譜柱上有保留行為。”

我覺(jué)得離子對(duì)試劑很像膠黏劑，一頭以離子吸引住待測(cè)物（也是離子），另一頭以碳鏈與固定性作用，從而把待測(cè)物保持在固定相上。它的優(yōu)點(diǎn)和缺點(diǎn)，都是因?yàn)檫@樣的特性。

2、試劑選擇

“離子對(duì)分為正離子對(duì)和負(fù)離子對(duì)，分析酸性樣品（確切的說(shuō)應(yīng)該是作用基團(tuán)）用正離子對(duì)試劑，分析堿性樣品用負(fù)離子對(duì)試劑。

正離子對(duì)試劑可以吸附帶負(fù)電荷的樣品組分，負(fù)離子對(duì)試劑反之。戊烷磺酸鈉、己烷磺酸鈉……十二烷基磺酸鈉都屬于負(fù)離子對(duì)試劑；四丁基溴化銨、四丁基硫酸氫銨一類屬于正離子對(duì)試劑。

離子對(duì)要考慮樣品體系的復(fù)雜性和干擾物的特性，先用原則一般盡可能使用碳鏈短的先，這樣可以避免強(qiáng)保留造成對(duì)柱子效能的影響，同時(shí)，濃度盡可能的低，以保證對(duì)柱子填料的穩(wěn)定性影響最小及清洗方便。”

看來(lái)做實(shí)驗(yàn)下手輕點(diǎn)兒好，從碳鏈短的開(kāi)始，從低濃度開(kāi)始，不行再慢慢加。不過(guò)這次的使用經(jīng)驗(yàn)是從碳鏈長(zhǎng)度中等的開(kāi)始，可以更快看到效果，節(jié)約摸索分析條件的時(shí)間。同時(shí)流動(dòng)相PH值盡可能低以確保離子化程度。

3、試劑的使用

“離子對(duì)試劑不一定是表面活性劑，如己烷和庚烷磺酸鈉，又如三乙胺或四丁基溴化胺，不具表面活性作用。所以用己烷和庚烷鹽就沒(méi)有泡末，用四丁基溴化胺也不產(chǎn)生氣泡。十二烷基磺酸鈉（或硫酸鈉），或者十六烷基溴化鈉（CTAB,一種做陰離子用的陽(yáng)性表面活性劑），在濃度高的時(shí)候容易產(chǎn)上泡末。做HPLC時(shí)流動(dòng)相里加的SDS或CTAB濃度一般不會(huì)太高，一般在0.1%以下，而且流動(dòng)相里有甲醇等有機(jī)溶劑，高濃度的有機(jī)溶劑有破乳的作用，因此，混合后的流動(dòng)相泡末應(yīng)該不會(huì)很多。另外，做電泳加入的SDS量很大的比如做蛋白質(zhì)SDS膠，或者毛細(xì)管電泳里的MECC，SDS濃度很高，而且沒(méi)有或者有很少比例的有機(jī)改性劑，當(dāng)然會(huì)有氣泡，跟HPLC不完全相同。”

達(dá)人們的意思我看明白了，就是有點(diǎn)泡沫不要怕，確保溶液搖勻就好。

使用離子對(duì)試劑時(shí)，調(diào)節(jié)保留時(shí)間的方式與普通反相不同，變化有機(jī)相比例沒(méi)有改變PH值來(lái)得有效。

“當(dāng)流動(dòng)相PH值較高時(shí)，樣品以中性形式存在，那么正電荷較少，相應(yīng)的保留較弱；當(dāng)流動(dòng)相PH值較低時(shí)，樣品便以質(zhì)子堿H+形式的離子狀態(tài)存在，那么正電荷與固定相上帶負(fù)電荷的-SO3強(qiáng)烈吸附，相應(yīng)的保留會(huì)非常強(qiáng)。”

“再說(shuō)明一下B物質(zhì)的pKa，其值為10.5，在pH為4.5、3.8時(shí)都以離子態(tài)存在，這點(diǎn)沒(méi)錯(cuò)，雖然都是離子態(tài)，都是99%以上，但從量上說(shuō)還是有點(diǎn)不一樣的。任何物質(zhì)以離子態(tài)存在時(shí)都有一個(gè)平衡的狀態(tài)：B＋（H＋）＝＝（BH＋），這里存在著一個(gè)平衡常數(shù)K（或者說(shuō)離解常數(shù)），于是pH不同時(shí)，H＋不同，對(duì)應(yīng)的B、BH＋也不同。所以才會(huì)出現(xiàn)pH不同，保留值會(huì)不同。

另外我認(rèn)為4.5和3.8的pH相差不大，其改變對(duì)物質(zhì)的保留值影響不會(huì)很大，因?yàn)樵诹鲃?dòng)相中還受到很多因素的影響。”

4、使用后清洗

大家都強(qiáng)調(diào)離子對(duì)試劑要沖洗較長(zhǎng)時(shí)間才能洗去。想想也知道那簡(jiǎn)直是一定的，使用前平衡了老半天呢，要是輕易就能洗去就怪了。

對(duì)于多數(shù)離子對(duì)試劑，清洗還是比較簡(jiǎn)單的，平時(shí)的水——甲醇就能奏效，只是時(shí)間必須長(zhǎng)點(diǎn)，2小時(shí)比較好。

有些例子比較特殊：

“如果用TBA的話應(yīng)該需要好好洗洗柱子，因?yàn)檫@種胺類的東西不容易洗干凈，且會(huì)慢慢溶解硅膠。通常TBA是用0.1%的磷酸，（其中含有100mM 高氯酸鈉）與甲醇 1：1 來(lái)洗。磷酸的作用是調(diào)節(jié)pH, 高氯酸鈉可以把胺帶下來(lái)，甲醇增加對(duì)有機(jī)物的溶解度。”

“根據(jù)試驗(yàn)經(jīng)驗(yàn)，SDS在酸中的溶解性較差，因?yàn)樗菑?qiáng)堿弱酸鹽，在酸性條件下可以生成不溶于水的弱酸十二烷基磺酸，但此酸在有機(jī)相中溶解性較好，所以即使在水相中有不溶解的SDS，在加入有機(jī)相后反而會(huì)使之溶解。所以在流動(dòng)相中不含有其他鹽時(shí)，完全可以用比例較高的有機(jī)相水洗滌。”

5、其他

很早就知道，醋酸銨可以起部分離子對(duì)試劑的作用，沒(méi)想到TFA也可以。

“英文文獻(xiàn)中是經(jīng)常稱之為ion-pair reagent的！而且不只是用來(lái)掩蔽填料上殘留的活性硅羥基，TFA的氟端還能與分析物的疏水部分相“配對(duì)”呢”

“我覺(jué)得緩沖液可以更準(zhǔn)確的控制所需的PH值，而加酸所得到的PH值不夠穩(wěn)定，很容易隨著溫度、流動(dòng)相組成的微小變化而改變，但是緩沖液中的鹽成分對(duì)色譜柱的使用壽命來(lái)講不是什么好事。

選用酸還是緩沖液來(lái)控制流動(dòng)相PH值，最好依據(jù)分析方法的耐用性來(lái)選擇！保留性、選擇性對(duì)PH的變化不是很敏感的話，加酸應(yīng)該就可以了！

另外：磷酸鹽緩沖液和醋酸鹽緩沖液可以控制的PH值范圍是不同的！

磷酸鹽可以控制PH值范圍在2.1～3.1和6.2～8.2

醋酸鹽可以控制的PH緩沖范圍是3.8～5.8”