1 化學和物理性質
葡聚糖凝膠是一種珠狀的凝膠,含有大量的羥基,很容易在水中和電解質溶液中溶脹。G型的葡聚糖凝膠有各種不同的交聯(lián)度,因此它們的溶脹度和分級分離范圍也有所不同。葡聚糖凝膠的溶脹度基本上不因鹽和洗滌劑的存在而受影響。
葡聚糖凝膠有不同的粒度。超細級的葡聚糖凝膠是用于需要極高分辨率的柱色譜和薄層色譜。粗級和中級的凝膠用于制備性色譜過程,可在較低的壓力下獲得較高的流速。另外,粗級也可用于批量工藝。
1.1 化學穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠不溶于一切溶劑(除非它被化學降解)。它在水、鹽溶液、有機溶劑、堿和弱酸性溶液中都是穩(wěn)定的,在強酸中凝膠骨架的糖苷鍵被水解。長期接觸氧化劑將破壞凝膠,因而應避免使用。
1.2 物理穩(wěn)定性
葡聚糖凝膠并不熔融,可以在濕態(tài)、中性PH進行滅菌或在高壓滅菌器120℃、30分鐘而不影響它的色譜性質。干態(tài)的凝膠加熱至120℃以上將開始焦糖化。葡聚糖凝膠的機械強度取決于交聯(lián)度。
2 產品說明
產 品 名 稱
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分 離 范 圍
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應 用
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葡聚糖凝膠 G-10
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<700
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緩沖液交換、脫鹽,分離小分子,去除小分子
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葡聚糖凝膠 G-15
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<1500
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緩沖液交換、脫鹽,分離小分子,去除小分子
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葡聚糖凝膠 G-25
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1000-5000
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工業(yè)上脫鹽及交換緩沖液
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葡聚糖凝膠 G-50
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1000-30000
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多肽分離、脫鹽、清洗生物提取液、分子量測定
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葡聚糖凝膠 G-75
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2000-70000
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蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定
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葡聚糖凝膠 G-100
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2000-120000
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蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定
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葡聚糖凝膠 G-150
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5000-300000
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蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定
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葡聚糖凝膠 G-200
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5000-600000
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蛋白分離純化、分子量測定、平衡常數(shù)測定
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3 使用方法
3.1 乙醇浸泡
在室溫下,將干粉浸泡于50-60%乙醇中至少24小時,并不斷攪拌以保證凝膠溶脹,用無鹽水洗去殘存的乙醇濾干。
3.2 無鹽水浸泡
室溫下,在無鹽水中充分溶脹24小時,間隙攪拌,以保證凝膠的完全溶脹。
3.3 鹽酸浸泡
在常溫下再用0.2N HCl浸泡12小時,間隙攪拌,濾干,水洗只中性。
3.4 裝柱
將溶脹好的凝膠根據(jù)裝柱要求一次性置入柱內,注意保持濕態(tài)裝柱,并避免柱內產生氣泡或斷層。
3.5 平衡
上樣前平衡層析柱至少3-5個柱體積直到記錄儀基線變得平穩(wěn)為止(流出液的PH值等于上柱的Buffer的PH值)。
3.6 上樣
凝膠過濾的上樣量一般為5%的柱床體積,我們建議初次上樣控制在1-2%的床體積,視分離情況可以調整;脫鹽時上樣量可以達到20%的柱床體積,柱高的選擇也與分離要求相關,柱高控制在40-50cm 以下,過高的凝膠層會引起較大的反壓,應當盡可能避免。難分離物質要有一定柱高和流速控制,脫鹽時高徑比為5:1即可。
3.7 洗脫方法
可以用無鹽水,也可以采用上柱時的緩沖液洗脫;在上柱Buffer中加入NaCl等梯度洗脫或鹽梯度洗脫也可以完全分離純化。
3.8 在位清洗(CIP)
凝膠使用十次后作一次CIP,目的是去除柱床內沉淀的及頑固殘留的蛋白。方法是以40cm/h用1M氫氧化鈉反向洗四個柱體積,再以至少三個柱體積平衡緩沖液再生。
(備注: 其它規(guī)格葡聚糖凝膠處理方法類似。)