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蛋白純化必須知道的試劑——DTT

2024/12/13 15:05:22  作者:中華試劑網(wǎng)


DTT應用領域

 
體外診斷試劑輔料
 
對蛋白質(zhì)的研究是理解生命現(xiàn)象的關鍵。
 
DTT二硫蘇糖醇作為一種強還原劑,可以還原蛋白質(zhì)中的二硫鍵,防止半胱氨酸殘基形成分子內(nèi)和分子間的二硫鍵,幫助我們保護蛋白質(zhì)中的巰基。
 
產(chǎn)品簡介
 
 
DTT全名是1,4-二硫代蘇糖醇,分子式是C4H10O2S2,分子量是154.25。
 
它看起來是一種白色粉末,有點像糖粉,但其實味道不太好聞。DTT兩個巰基基團賦予DTT強還原性,能夠與其他分子發(fā)生氧化還原反應,將其還原為較低價態(tài)。DTT可溶于水與乙醇,在工作溶液里,DTT的兩個巰基能將蛋白質(zhì)中的二硫鍵(S-S)有效還原,使其轉(zhuǎn)變?yōu)閮蓚€單獨的硫氫鍵(-SH)。
 
DTT的還原性很大程度上是由于其氧化狀態(tài)六元環(huán)(含二硫鍵)的構(gòu)象穩(wěn)定性。在pH值為7-9時最有效而在pH低于3時失效。因此在使用時通常置于弱堿性溶液中以保持其穩(wěn)定性。
 

蛋白質(zhì)研究中的應用
 
 
DTT在蛋白質(zhì)研究中的應用主要集中在以下幾個方面:
 
·蛋白質(zhì)還原
 
DTT能夠還原蛋白質(zhì)中的二硫鍵,這對于研究蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)和功能至關重要。通過破壞蛋白質(zhì)分子中的二硫鍵,DTT有助于蛋白質(zhì)的解折疊或去聚合,從而暴露蛋白質(zhì)的內(nèi)部結(jié)構(gòu),便于進一步的研究。
 
·防止蛋白質(zhì)聚合
 
在某些條件下,蛋白質(zhì)可能會發(fā)生聚合,影響純化效果。DTT可以通過還原二硫鍵,降低蛋白質(zhì)的聚合傾向,提高純化效率和效果。
 
·蛋白質(zhì)巰基保護
 
DTT常用作蛋白質(zhì)巰基的保護劑,防止蛋白半胱氨酸殘基形成分子內(nèi)和分子間的二硫鍵,這對于維持蛋白質(zhì)的活性和穩(wěn)定性非常重要。
 
·核酸研究
 
DTT可破壞RNase蛋白質(zhì)中的二硫鍵,使RNA酶變性,有助于如RNA建庫、RNA擴增等實驗的進行。

使用條件和注意事項
 
 
DTT在蛋白純化中的使用條件和注意事項:
 
·濃度控制‌
 
DTT的濃度需要根據(jù)實驗的具體需求和蛋白質(zhì)的特性來確定。過高的DTT濃度可能會導致蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)過度破壞,影響其生物活性;而過低的濃度則可能無法有效地還原二硫鍵,導致蛋白質(zhì)無法充分釋放和純化。
 
·溫度和時間控制‌
 
DTT的加入時間和溫度等因素也需要嚴格控制,以確保實驗結(jié)果的準確性和可靠性。
 
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