重組蛋白復(fù)溶與保存如何操作?
1)凍干粉在運(yùn)輸過程中,會因?yàn)橥饬Φ囊蛩卣掣接诠鼙诨蛘吖苌w上面,在開蓋之前,先通過離心操作,將凍干粉收集于管底,避免損失很浪費(fèi)。開蓋前快速離心10000-12000rpm,30s;若沒有高速離心機(jī),3000-3500rpm 離心5min。
2)離心之后,向凍干粉中加入提供的復(fù)溶Buffer,用槍頭輕輕吹打混勻,重懸至濃度不低于100 μg/mL。注:分裝凍存時(shí),蛋白濃度不低于 100 ug/mL,且每管的體積不可小于20 μL。
3)用復(fù)溶Buffer直接溶解的細(xì)胞因子或重組蛋白液體可在 2-8℃ 最長保存1周。對于周期較短的實(shí)驗(yàn),可以直接取該條件下保存的重組蛋白溶液加入到培養(yǎng)體系內(nèi)即可,待一周之內(nèi)用完。若要長期保存,則需用含載體蛋白 (0.1% BSA、5% HAS、10% FBS 或 5% 海藻糖) 的溶液進(jìn)一步稀釋,然后分裝凍存于 -20℃ 至 -80℃。
4)保存產(chǎn)品時(shí)請避免反復(fù)凍融。反復(fù)凍融,冰晶會破壞重組蛋白的空間結(jié)構(gòu),導(dǎo)致蛋白變性形成多聚體和重組蛋白構(gòu)象改變,從而降低抗體的結(jié)合能力,也加快了蛋白的降解速度。